1 嘗試局部
1. 1 儀器與試劑
Waters 液相色譜儀- UV 481 檢測器, N2000 色譜任務站; 扭轉蒸發儀; UV三用紫外闡發儀 。精制大豆磷脂 ; 銀杏提取物, 此中銀杏總黃酮含量不少于24% , 銀杏內酯含量大于6% , 銀杏酸含量小于10 - 6( w) ; 槲皮素、山柰素、異鼠李素、白果內酯B、銀杏內酯A、銀杏內酯B 規范品(供含量測定用) 均購于中國藥品生物成品檢定所; 甲醇、二氯甲烷、*、乙醇等試劑均為闡發純, 嘗試用水均為二次蒸餾水。
1. 2 銀杏磷脂復合物制備
將肯定(ding)量的(de)(de)銀杏葉領(ling)取物與磷(lin)脂在肯定(ding)前提下下揭(jie)示后(hou), 排(pai)壓方(fang)法撤除揭(jie)示高(gao)沸點溶(rong)(rong)劑; 其后(hou)再干預有效(xiao)二(er)(er)氯二(er)(er)氧化氮氣體, 充(chong)沛消融此中的(de)(de)磷(lin)脂及包覆物; 過慮, 采集濾液, 排(pai)壓方(fang)法分餾將二(er)(er)氯二(er)(er)氧化氮氣體蒸干, 采集固態(tai), 為(wei)黃(huang)棕(zong)色納米(mi)銀溶(rong)(rong)液。用于(yu)的(de)(de)下方(fang)式核查(cha)黃(huang)酮(tong)的(de)(de)包覆率。
1. 3 銀杏磷脂復合物中黃酮復合率的測定
1. 3. 1 色譜前提
確定2000 版藥(yao)典十部 銀杏葉下黃酮硫含量判(pan)斷(duan)的手(shou)段。Waters C18 柱(300mm×4. 5mm, 4. 5μm) ; 行動相: 甲醇- 0. 5 %磷酸(suan)水鹽溶液(空間比50 ∶50) ; 空氣(qi)流速1. 0 mL/ min ; 判(pan)斷(duan)吸光度365 nm;進樣(yang)量為10μL。
1. 3. 2 規范溶液的制備
融洽(qia)稱取在110 ℃乏味(wei)2 h 的槲皮(pi)素6. 0 mg , 山柰(nai)素3. 4 mg , 異鼠李素2. 1mg , 置統(tong)一的50 mL 存儲(chu)容量(liang)瓶中(zhong), 用(yong)甲醇消融并精濃(nong)至精確度, 是(shi) 可比性(xing)品飽和(he)溶(rong)液(ye)。
1. 3. 3 銀杏葉提取物樣品溶液的制備
優勢互補稱取銀杏(xing)樹葉(xie)提現物50 mg , 加甲醇- 25%稀鹽酸(suan)(表面積比4 ∶1)參雜液5 mL , 此回流30 min , 放冷, 轉至至50 mL 儲存(cun)量瓶中,加甲醇至刻度盤, 搖勻即得。
1. 3. 4 銀杏磷脂復合物樣品溶液的制備
稱取75 mg 的結合物(wu), 同上法治社會備樣板懸濁(zhuo)液。
1. 3. 5 產物中黃酮復合率的測定
得出銀杏葉磷脂塑料物中總黃酮醇苷的品控分數線( w) , 按式算計黃酮組合率:
式(shi)中w 表(biao)演(yan)茶葉(xie)品(pin)(pin)控成(cheng)績(一組詞) , 總黃酮醇苷茶葉(xie)品(pin)(pin)控成(cheng)績由下式(shi)領(ling)取:
w(總黃酮(tong)醇苷(gan)) = [ w(槲皮素(su)) + w(山(shan)柰素(su)) + w(異鼠李(li)素(su)) ] ×2. 51
2 重大成(cheng)就與會商
2. 1 闡發形(xing)式的選好(hao)
如用(yong)分光(guang)光(guang)度計分光(guang)光(guang)度法測量銀杏(xing)葉樹(shu)樹(shu)中黃(huang)酮(tong)化學成(cheng)分時干預AlCl3 等(deng)用(yong)作顯色劑, 但磷脂也與顯色劑感召, 在銀杏(xing)葉樹(shu)樹(shu)黃(huang)酮(tong)的(de)zui大吸收光(guang)波波長360 nm處(chu)也是(shi)有(you)強(qiang)吸收, 可能(neng)會(hui)導致攪擾(rao)。用(yong)藥指導典所載HPLC原則(ze), 符合物在強(qiang)酸必(bi)要條件進水解, 磷脂陽型(xing)對比分析在360 nm處(chu)不吸收, 無攪擾(rao), 所以可依該(gai)法檢(jian)測法符合物中銀杏(xing)葉樹(shu)樹(shu)總(zong)黃(huang)酮(tong)醇苷的(de)硫含量, 見圖(tu)1。
2. 2 規范曲線的繪制
離別嚴密吸收率要求懸濁液3、5、6、8、10、15、20μL , 依照規定可以達到色譜實質進樣闡發。槲皮素( Y1) 、山柰素(Y2) 、異鼠李素( Y3) 的水平(mg/ mL) 與峰體積( X1、X2、X3) 的規則化回歸方程組為Y1 = 1. 383 ×10 - 7 X1 + 0. 037 , r1 = 0. 999 7 ;Y2 = 1. 264 ×10 - 7 X2 + 0. 029 , r2 = 0. 999 5 ; Y3 =1. 377 ×10 - 7 X3 + 0. 017 , r3 = 0. 999 6。
2. 3 收受接管率及緊密度測定
緊密稱取5 份已知總黃酮醇苷含量的銀杏磷脂復合物, 每份60 mg 別離插手槲皮素4 mg、山柰素2 mg、異鼠李素1 mg , 按1. 3. 4 方式制備樣品,測得總黃酮醇苷的加樣收受接管率為96% , RSD 為1. 9 %。取銀杏磷脂復合物的樣品5 份, 每份約80 mg , 緊密稱定, 別離按方式制得供試品溶液, 測定總黃酮醇苷含量的RSD 為2. 1 %( n = 5) 。
2. 4 不變性嘗試
取(qu)槲(hu)皮素0. 08 mg/ mL、山柰素0. 04 mg/ mL、異鼠(shu)李素0. 02 mg/ mL 的(de)(de)進(jin)(jin)行可比性(xing)品(pin)氫氧化鈉溶液在配置確當天和后好(hao)幾天的(de)(de)有什么區(qu)別時刻進(jin)(jin)樣校正, 得(de)出總黃酮(tong)醇苷含量的(de)(de)RSD 為2. 8% , 標出進(jin)(jin)行可比性(xing)品(pin)合(he)適在3 d 內不改變。
2. 5 陽性對比嘗試
緊(jin)密聯系(xi)稱(cheng)取銀杏葉葉獲取物的(de)陽(yang)型試品90 mg , 依(yi)據(ju)行為1. 3. 4 冶煉金(jin)屬陽(yang)型比(bi)液, 進樣校正, 在3 個比(bi)品出峰的(de)位置不(bu)表現攪擾校正的(de)色譜峰。
2. 6 復合物制備方式的優化
以(yi)(yi)表(biao)1 的(de)3 身分(fen)(fen)3 個數(shu)量消停正交構想(xiang)常(chang)試, 做(zuo)L9(34) 表(biao), 以(yi)(yi)1. 3. 5 中(zhong)黃(huang)(huang)酮結合(he)(he)(he)率是測評(ping)總體(ti)目標。依(yi)據很(hen)差闡發贏得, RB > RA > RC , 影向身分(fen)(fen)必(bi)有妖挨次為(wei)(wei)B > A > C。此中(zhong)溶(rong)液身分(fen)(fen)是影向黃(huang)(huang)酮裝換率的(de)基(ji)(ji)本(ben)身分(fen)(fen), 銀杏葉樹磷脂(zhi)結合(he)(he)(he)物*制作依(yi)據為(wei)(wei)A3B2C3 , 即銀杏葉樹與磷脂(zhi)的(de)用量為(wei)(wei)1 ∶2 , *為(wei)(wei)溶(rong)液, 體(ti)現了出時(shi)分(fen)(fen)為(wei)(wei)20 h。從常(chang)試成(cheng)效也(ye)能看出, 以(yi)(yi)相(xiang)對相(xiang)對介電常(chang)數(shu)較小的(de)*和二氯丁(ding)烷(wan)- 甲醇(占地比(bi)6 ∶1) 為(wei)(wei)體(ti)現了出溶(rong)液時(shi), 結合(he)(he)(he)率較高。而(er)于(yu)相(xiang)對相(xiang)對介電常(chang)數(shu)大的(de)甲醇為(wei)(wei)體(ti)現了出溶(rong)液時(shi)中(zhong)藥的(de)結合(he)(he)(he)率較低, 是仍然(ran)(ran)在非(fei)(fei)質子溶(rong)液中(zhong)消停體(ti)現了出, 非(fei)(fei)常(chang)有利(li)于(yu)體(ti)現了出物間的(de)你我度(du)化(hua)。隨磷脂(zhi)的(de)身材比(bi)例圖思想(xiang)進步, 結合(he)(he)(he)率呈提(ti)升趨勢。基(ji)(ji)本(ben)仍然(ran)(ran)磷脂(zhi)對中(zhong)藥也(ye)能符合(he)(he)(he)必(bi)需的(de)增溶(rong)度(du)化(hua) , 且這(zhe)兩類工程物資當中(zhong)的(de)鍵合(he)(he)(he)度(du)化(hua)有必(bi)需的(de)用量度(du), 2 ∶1 的(de)身材比(bi)例圖非(fei)(fei)常(chang)有利(li)于(yu)這(zhe)兩者(zhe)充裕地你我度(du)化(hua)。
2. 7 復合物中銀杏內酯的查抄
銀(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)杏內(nei)酯(zhi)是銀(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)杏生(sheng)成(cheng)物(wu)(wu)中至(zhi)(zhi)關重要(yao)的吸(xi)附性(xing)氧(yang)含量,對銀(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)杏磷(lin)脂(zhi)黏結物(wu)(wu)的藥用(yong)價值吸(xi)附性(xing)氧(yang)有至(zhi)(zhi)關重要(yao)的表決是啥意思。 取(qu)品(pin)性(xing)比是1 ∶2 ∶3 的銀(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)杏生(sheng)成(cheng)物(wu)(wu)、磷(lin)脂(zhi)弱(ruo)陽(yang)評測和銀(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)杏磷(lin)脂(zhi)黏結物(wu)(wu)開始(shi)薄層層落實析, 成(cheng)績(ji)如圖已知2。可以看到在黏結物(wu)(wu)中已經有白果內(nei)酯(zhi)B、銀(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)杏內(nei)酯(zhi)A、B 的出(chu)現, 磷(lin)脂(zhi)無(wu)攪擾。雖不購(gou)得銀(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)杏內(nei)酯(zhi)C 的原則(ze)品(pin), 但與專著[ 15]圖譜對比, 也可推知有銀(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)杏內(nei)酯(zhi)C的出(chu)現。
2. 8 復合率的測定
經1. 3. 3 各種測試銀杏葉提現物的總黃酮含量為25. 40 %( n = 3) 。在*加工制作工藝 必要條件下, 反反復復3 次常試, 黃酮復合型率均高出98%。挽回物中黃酮醇苷含鐵大約8. 30 %。
在線征詢