液相色譜儀HPLC 測定膽酸和豬去氧膽酸的含量
更新時候：2017-01-05 點擊次數：4664次
1 儀器設備與試藥HPLC液質色譜儀; SPD-UV 判斷器。膽酸差別性品( 批號100078-200414) 、豬去氧膽酸差別性品( 批號100087-200610; 標記色度為:97. 3%) 均由中中藥飲片生物學半成品檢定所市場出清; 膽酸、豬去氧膽酸各10 批; 乙腈為色譜純; 另一個微生物培養基均為闡發純。2 方試與課題2. 1 色譜先決條件離子交換柱: Diamonsil-C18( 4. 6 mm × 150 mm，5μm) ; 項目相: 乙腈-水-磷酸( 35 ∶ 65 ∶ 0. 1) ; 論文檢測光的波長: 192 nm; 柱溫: 25 ℃; 水流量: 1. 5 mL·min － 1。色譜圖見圖1。
圖1 HPLC 圖譜A. 膽酸價格比對品; B. 豬去氧膽酸價格比對品; C. 膽酸供試品; D. 豬去氧膽酸供試品 2. 2 硫酸銅溶液準備2. 2. 1 相對品飽和溶液提純緊湊聯系稱取膽酸相對品15. 77 mg，放入10 mL 量瓶中，加60% 乙腈制作成每1 mL含膽酸1. 577 mg 的相對品鹽液體; 再緊湊聯系稱取豬去氧膽酸相對品9. 90 mg，同法紀作成每1 mL 含豬去氧膽酸0. 963 3 mg 的相對品鹽液體，即得。2. 2. 2 供試品液體制法優勢互補稱取膽酸、豬去氧膽酸各10 mg，分離處于10 mL 量瓶中，加60%乙腈使消融并萃取至刻度盤，搖勻，濾過，取續濾液，即得。2. 3 方式方法學會考2. 3. 1 線形離別優勢互補量取膽酸和豬去氧膽酸比較品鹽溶液各2，5， 10， 15， 20 μL，吸取液質色譜儀，測量峰空間值。以膽酸和豬去氧膽酸相互之間的比較品進樣量( μg) 和峰空間值立即停止重歸模型妥善處理，重歸模型方程組離別為，膽酸: y = 12 504x + 917. 37，r = 0. 999 5; 豬去氧膽酸: y = 7 995. 4x + 41. 437，r = 0. 999 2，膽酸的波形干系總量為: 3. 154 ～ 31. 540 μg; 豬去氧膽酸的波形干系總量為: 1. 927 ～ 19. 266 μg。2. 3. 2 zui低檢驗限分別取膽酸和豬去氧膽酸進行對比品溶劑，用60%乙腈提液30 倍，按上述所說色譜依據進樣10 μL，測得信噪比( S /N) = 3，故膽酸、豬去氧膽酸的zui低檢則限分別為0. 5 和0. 3 μg。2. 3. 3 緊體積密度離別時取膽酸和豬去氧膽酸可比性品稀硫酸，按這些色譜首要條件進樣10( L，維持6 次。優秀成果膽酸RSD 為0. 29%; 豬去氧膽酸RSD 為0. 65%。2. 3. 4 多次性取膽酸( 批號B1-09-05-02) 和豬去氧膽酸( 批號B2-09-05-01) 合格品，照“2. 2. 2”項上方式配制供試品稀硫酸，分別平行面試穿6 份，核查膽酸和豬去氧膽酸的的含量。課題膽酸RSD 為0. 71%; 豬去氧膽酸RSD 為0. 81%。2. 3. 5 沒變性取膽酸( 批號B1-09-05-02) 和豬去氧膽酸( 批號B2-09-05-01) 原材料，照“2. 2. 2”項右上方式備制供試品鹽溶液，離別在0，2，4，6，8 h 進樣10μL，測試峰戶型值。研究成果膽酸RSD 為0. 56%; 豬去氧膽酸RSD 為1. 4%。2. 3. 6 加樣收受移交率選擇密實稱取膽酸供試品( 批號B1-09-05-02，成分: 83. 4%) 非常合適( 約相當于膽酸成分為10 mg) 、豬去氧膽酸供試品( 批號B2-09-05-01，成分為73. 0%) 非常合適( 約相當于豬去氧膽酸成分為8 mg) ，離別時放于10 mL 量瓶中，加60%乙腈使消融并溶縮至刻度尺。再密實量取膽酸比照圖品稀硫酸( 氧質量濃度為5. 006mg·mL － 1 ) 、豬去氧膽酸比照圖品稀硫酸( 氧質量濃度為3. 988 mg·mL － 1 ) 各2 mL，離別時干預上面的膽酸、豬去氧膽酸供試品稀硫酸中，混勻即得。離別時垂直體驗6 份，法測定成分。成績膽酸收受打壓比率:98. 98%，RSD 為0. 42%; 豬去氧膽酸收受打壓比率:98. 29%，RSD 為0. 61%，成績見表1，2。
2. 4 合格品分量測定法取膽酸和豬去氧膽酸原材料，照“2. 2. 2”項右下方式制取供試品水溶液，按據此色譜先決條件進樣10( L，檢測法膽酸和豬去氧膽酸的分量。工作成果見表3，4。
3 會商膽酸原有醫療藥品正規系認同紅外光譜分光光度法關閉程序含鐵法檢查測量法，豬去氧膽酸則是認同酸性滴定法法檢查測量法含鐵，及以上兩大類手段都存在控制煩瑣、準確度差、炫舞心悅性好等不對謬誤，這段話回收利用HPLC-UV 法檢查測量膽酸及豬去氧膽酸含鐵，手段簡短、準確，夠到位對兩大類原料的急速一定量闡發。本文中供試品的備制手段及色譜本質重要性對比《華人藥典》2006年版一款“清開靈吃藥液”項下膽酸的含鐵法檢查測量法手段。膽酸和豬去氧膽酸均為紅外光譜結尾接收入( 192nm) ，舒經度多方面較蒸發掉光散射查測器略微減色，但斟酌到HPLC-ELSD 實驗儀器較尊貴，混用性很弱，是以在基本準則質量闡發中，HPLC-UV 法相對混用。膽酸的占比范圍按標準化不能不降至80. 0%，經途整個過程上面10 批圖紙的檢驗研究成果就可以看不出，本標準化合適于液質色譜法; 而豬去氧膽酸標準化占比為不能不降至98. 0%( 弱酸性滴定法) ，如果弱酸性滴定法所檢驗原料的專屬性能差，能與NaOH 生產反映了的弱酸性運輸均會被檢驗出來的，是以根據液質色譜法檢驗豬去氧膽酸占比所有根本降至滴定法，依據上面對10 批圖紙的實際情況檢驗周圍環境，可訂定豬去氧膽酸占比范圍為: 本品按浪費時間品算計，含豬去氧膽酸( C24H40O4) 不能不降至70. 0%。上面標準化就可以看作膽酸及豬去氧膽酸的品行要求標準化。
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